blot原理及步骤
什么是ecl？
什么是ecl？
ECL（enhanced chemiluminescence）是指一种具有较高的化学发光强度的试剂。
中文名:增强型化学发光
外文名:enhanced chemiluminescence；ECL
类型:化学发光试剂
ECL在化学领域，是一种化学发光试剂。enhanced chemiluminescence
化学发光试剂，一般是WesternBlot的最后一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆盖pvdf膜，可以显色来观察实验结果。
原理：一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢，在辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光。
在发光过程中不需要消耗HRP,HRP只是起催化作用，所以只要HRP没降解失活，是可以重复加发光液的。但HRP作为一种蛋白酶，在室温放置时间过长，是会降解的；同时在发光过程中有什么物质（比如显影液）污染了膜的话,也有可能灭活膜上的HRP。
wb试验可以测植物蛋白吗？
可以。WB（Western Blot）即蛋白印迹法，其原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
WB中检测样本来源主要是细胞、组织、微生物、植物等蛋白样本；在WB检测中，样本中蛋白提取的是否充分，在整个WB检测中非常的重要。样品提取的方法常见的为机械法、物理法和化学及生物化学方法。
westernblot的目的？
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。Western Blot显色的方法主要有以下几种： i. 放射自显影 ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色值得一提的是，western blot 这个名称的由来很有意思。最开始做印迹工作的是一个叫做Southern的科学家，但印迹的对象是DNA链，他把这种技术称为Southern blot，后来类似的出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为Northern和Western，与这两个技术的发明人没有关系了。