考马斯亮蓝法测蛋白质含量怎么算 考马斯亮兰R250液体,怎么配置测蛋白质浓度?

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考马斯亮蓝法测蛋白质含量怎么算

考马斯亮兰R250液体,怎么配置测蛋白质浓度?

考马斯亮兰R250液体,怎么配置测蛋白质浓度?

R250不能用来测蛋白质浓度的,G250用来测蛋白质浓度100mg考马斯亮蓝G-250溶于50 ml 95%乙醇,加入100 ml磷酸然后补加水至1 L,Whatman1号滤纸过滤。

考马斯亮蓝与蒸馏水反应为什么变绿?

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中,使用的水最低要求是蒸馏水,更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制,标准曲线的制作都要用到水。
如果不是使用蒸馏水,可能水里面会有一些游离的离子或者电解质,会影响试剂配制的准确性,干扰实验结果。
而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝发生变色反应,这样制作的标准曲线会比实际值偏高,导致最终浓度检测的结果比实际结果偏低。

考马斯亮蓝怎么去除?

处理方法:
考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合,反应快速,并且稳定,无法用普通试剂洗掉。待一两周左右,皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法有什么优点?

  考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法的优点是:  
1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;  
2.其结合物在室温下1h内保持稳定。  
3.该法试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1,000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。  考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。